Zdroj: Slovenská poľnohospodárska knižnica - Katalóg
Počet záznamov: 1
Chitinase from Drosera binata and its use in terms of plant protection against biotic stress
Názvové údaje Chitinase from Drosera binata and its use in terms of plant protection against biotic stress = Chitináza z Drosera binata a jej využitie pri ochrane rastlín pred biotickým stresom / Veronika Mikitová ; supervising lecturer Jana Libantová Autor-i Mikitová Veronika, ; SPUFBP31 (aut.)
Libantová, Jana (škol.)Korporácia Slovenská poľnohospodárska univerzita (Nitra, Slovensko). Fakulta biotechnológie a potravinárstva. Ústav biotechnológie Vyd.údaje 2025 Rozsah 113 s. : grafy, ilustr., príl., tab. ; 30 cm Poznámky V práci uvedený projekt - VEGA 2/0041/20, VEGA 2/0021/24, APVV-23-0488 a projekt Drive4SIFood 313011V336 . Bibliografia s. 78-100 . Resumé anglicky, slovensky . Doktorandská dizertačná práca (PhD.).- Ústav biotechnológie FBP SPU v Nitre Predmet chitinázy rosička rozvetvená mäsožravé rastliny génová expresia purifikácia využitie rastlín genetická ochrana rastlín biotické faktory dizertácie Anotácia Autorský abstrakt: Chitinázy patria medzi značne rozšírené enzýmy prítomné v rôznych organizmoch, ako sú baktérie, huby alebo rastliny. Sú schopné rozkladať chitínové substráty hydrolyzovaním glykozidických väzieb polysacharidu zloženého z N-acetylglukozamínových jednotiek (GlcNAc). Predmetom dizertačnej práce je geneticky nepreskúmaný druh Drosera binata, ktorý bol získaný ako dar od Ústavu experimentálnej botaniky Akadémie vied ČR a následne pestovaný in vitro. Z pletív D. binata bol izolovaný gén pre chitinázu, člen rodiny glykozidových hydroláz 19, ktorý vykazuje silnú sekvenčnú homológiu s inými extracelulárnymi chitinázami zistenými u druhov rodu Drosera. Porovnaním sekvencií genómovej a komplementárnej DNA bola určená exón-intronová štruktúra génu chitinázy, ktorá odhalila výskyt dvoch intrónov s dĺžkou 162 a 148 bp. Odvodená aminokyselinová sekvencia chitinázy z D. binata pozostáva z 301 aminokyselinových zvyškov s molekulovou hmotnosťou ~ 31,71 kDa a teoretickým izoelektrickým bodom 5,35. Na štúdium jej enzymatických vlastností bol čítací rámec cDNA chitinázy bez 5´- sekvencie kódujúcej signálny peptid klonovaný do expresného vektora pET32a a jeho derivátu bez sekvencie fúzneho proteínu tioredoxínu. Po robustnej expresii rDbChit, rDbChit-Trx_N6 v bunkách Escherichia coli boli rekombinantné proteíny izolované, purifikované a biochemicky analyzované. Oba enzýmy vykazovali maximálnu aktivitu na napučanom FITC-chitínovom substráte v rozmedzí pH 2,5 až 3,0. Optimálny teplotný rozsah pre aktivitu enzýmu sa pohyboval od 15 do 30 °C, pričom oba enzýmy si zachovali viac ako 80 % aktivity pri 10 °C. Pri porovnaní rDbChit a rDbChit-Trx_N6 s komerčne dostupnou chitinázou zo Streptomyces griseus vykazovala najvyššiu enzýmovú aktivitu najvyššiu rDbChit-Trx_N6, nasledovala chitináza zo S. griseus s 80 % aktivitou a rDbChit s 52 % aktivitou. In silico analýza 3D modelov rekombinantných chitináz naznačila, že tioredoxín fúzovaný s chitinázou na N-koncoch znižuje index nestability, čo vedie k vyššej enzýmovej aktivite rDbChit-Trx_N6. Author’s abstract: Chitinases are widely spread enzymes present in many different organisms like bacteria, fungi or plants. They´re able to break down chitin substrates by hydrolysing the glycosidic bonds of a polysaccharide composed of N-acetylglucosamine (GlcNAc) units. The subject of the dissertation is the genetically unexplored species Drosera binata, which was obtained as a gift from the Institute of Experimental Botany of the Czech Academy of Sciences and subsequently grown in vitro. A novel chitinase gene, a member of the glycoside hydrolase 19 family, was isolated from tissues of D. binata. It shows a strong homology to other extracellular chitinases found in Drosera species. The exon-intron structure of the chitinase gene was determined by comparing genomic and complementary DNA sequences, revealing the occurrence of two introns of length 162 and 148 bp. The deduced amino acid sequence of chitinase from D. binata consists of 301 residues, with a molecular mass of ~ 31.71 kDa, and a theoretical isoelectric point of 5.35. For the study of its enzymatic properties, an open reading frame of cDNA chitinase lacking the 5´- sequence encoding the signal peptide was cloned into the pET32a expression vector and its derivative lacking the thioredoxin tag. Following overexpression of rDbChit, rDbChit-Trx_N6 in Escherichia coli cells, the recombinant proteins were isolated, purified and biochemically analysed. Both enzymes exhibited the maximum activity on a swollen FITC-chitin substrate at a pH range of 2.5 to 3.0. The optimal temperature range spanned from 15 to 30°C, with both enzymes retaining over 80% of activity at 10°C. When rDbChit and rDbChit-Trx_N6 were compared to commercially available chitinase from Streptomyces griseus, rDbChit-Trx_N6 exhibited the highest enzyme activity, followed by S. griseus chitinase with 80% of the activity, and rDbChit with 52% of the activity. In silico analysis of 3D models of recombinant chitinases suggested that thioredoxin fused to the chitinase at the N-termini decreased the instability index, leading to the higher enzyme activity of rDbChit-Trx_N6. Krajina Slovensko Jazyk dok. angličtina URL http://opac.crzp.sk/openURL?crzpSigla=spunitra&crzpID=52212 Počet ex. 1, z toho voľných 0, prezenčne 1 Báza dát Kvalifikačné práce 
kniha
Signatúra Dislokácia Umiestnenie Voľné VP-100176 Štúrova - záverečné práce len prezenčne
Zdroj: Slovenská poľnohospodárska knižnica - Katalóg
Počet záznamov: 1